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無血清的培養(yǎng)基的制備
現(xiàn)在應(yīng)用的無血清培養(yǎng)基種類很多,一些廠家可提供針對特殊類型細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基.制備無血清培養(yǎng)基的操作方法與制備常規(guī)培養(yǎng)基的程序大致相同.配制時要用超純的試劑和水,小心配制Ca2+,Fe2+或Fe3+的溶液,防止產(chǎn)生沉淀.在堿性pH的條件和有磷酸鹽存在的條件下金屬鹽溶液會產(chǎn)生沉淀,在培養(yǎng)基或鹽溶液經(jīng)過高壓滅菌后尤為如此,所以儲存液中的陽離子必須保存在低pH條件下,并且要保證無磷酸鹽的存在.溶液要經(jīng)過高壓滅菌或過濾消毒.通常推薦的方法是臨用培養(yǎng)基之前再加陽離子.或者將各種組分通常要配制成一系列的儲存液:1000×的礦物質(zhì)和維生素,50×的酪氨酸,色氨酸,苯丙氨酸溶解于0.1mol/L HC1中,100×的必需氨基酸溶解于水中,10×的鹽溶解于水中,還有其他的特殊輔助因子,脂類等配制成1000×溶液.這些成分要按照正確的比例配制并稀釋到終的濃度,然后檢測pH和滲透壓.
建議在使用培養(yǎng)基之前再分別加生長因子,激素,和細(xì)胞黏附因子,并且要調(diào)整到適合于特定的實驗條件.
