CCK-8試劑盒是一種用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的常用試劑盒。它基于一種水溶性四唑鹽（WST-8）的化學(xué)反應(yīng)，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞活性、增殖、毒性、藥物篩選等實(shí)驗(yàn)中。 原理
CCK-8試劑盒中的核心成分是WST-8（4-氯-1-甲基-2-苯基-3-（4-硝基苯）-2H-四唑氯化物）。WST-8本身是無色的，在細(xì)胞內(nèi)的NAD(P)H依賴性脫氫酶作用下，它會(huì)還原為橙黃色的甲zanazon（formazan）產(chǎn)物。此反應(yīng)是依賴于活細(xì)胞的代謝活性，活細(xì)胞內(nèi)有較高的代謝水平，因此它們能夠還原WST-8，而死亡細(xì)胞則沒有還原能力。通過測量形成的甲zanazon的吸光度（一般在450 nm處），可以間接反映細(xì)胞的生長和存活情況。
主要成分
CCK-8試劑盒通常包含：
1.WST-8溶液：用于測量細(xì)胞活性。
2.配套緩沖液：維持溶液的穩(wěn)定性，通常包括PBS等。
使用方法
1.細(xì)胞培養(yǎng)：將待測試的細(xì)胞接種在96孔板中，培養(yǎng)一段時(shí)間，通常是24、48、72小時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要。
2.加入CCK-8試劑：向每個(gè)孔中加入一定體積的CCK-8試劑。通常是10μL CCK-8溶液加入到每孔中，具體加入量會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行調(diào)整。
3.孵育：將96孔板繼續(xù)在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時(shí)（通常是2小時(shí)），使得反應(yīng)充分進(jìn)行。此時(shí)，活細(xì)胞會(huì)還原WST-8，形成顏色。
4.測量吸光度：使用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測量每個(gè)孔的吸光度（OD值）。吸光度值與細(xì)胞數(shù)目成正比，細(xì)胞數(shù)目越多，吸光度越高，代表細(xì)胞活性越強(qiáng)。
應(yīng)用領(lǐng)域
1.細(xì)胞增殖/生長檢測
CCK-8試劑盒常用于檢測細(xì)胞的增殖情況。例如，可以通過CCK-8檢測藥物或化學(xué)品對細(xì)胞增殖的影響，觀察它們是否具有抑制或促進(jìn)細(xì)胞生長的作用。
2.細(xì)胞毒性檢測
通過測定藥物或其他處理對細(xì)胞存活的影響，CCK-8試劑盒可以用于毒性實(shí)驗(yàn)。在一定濃度下，藥物的毒性會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞存活率下降，從而降低吸光度。
3.藥物篩選和療效評價(jià)
研究人員可以利用CCK-8試劑盒來評估藥物的治療效果，特別是篩選抗癌藥物、抗病毒藥物等的活性。
4.細(xì)胞代謝檢測
由于WST-8還原反應(yīng)依賴于細(xì)胞的代謝活性，CCK-8試劑盒也可用于研究細(xì)胞的代謝情況。
5.細(xì)胞生物學(xué)研究
CCK-8試劑盒也常用于實(shí)驗(yàn)室中對細(xì)胞生物學(xué)過程的研究，比如檢測細(xì)胞周期、細(xì)胞分化等過程中的細(xì)胞活性變化。
優(yōu)點(diǎn)
1.高靈敏度：CCK-8試劑盒比傳統(tǒng)的MTT法更靈敏，能夠檢測較低濃度的藥物或其他化學(xué)物質(zhì)對細(xì)胞的影響。
2.操作簡單：使用CCK-8試劑盒不需要有機(jī)溶劑、酸性溶液等，實(shí)驗(yàn)操作相對簡單，且結(jié)果穩(wěn)定。
3.適用性廣：可廣泛用于不同類型的細(xì)胞、不同的實(shí)驗(yàn)平臺（如96孔板、24孔板等）以及各種生物醫(yī)藥研究領(lǐng)域。
4.無毒性：與MTT試劑盒相比，CCK-8試劑沒有毒性，使用后無需進(jìn)行有毒化學(xué)試劑的處理。
CCK-8試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、活性、毒性檢測的試劑盒，利用水溶性四唑鹽（WST-8）在活細(xì)胞代謝的作用下還原形成有色產(chǎn)物，進(jìn)而通過光度計(jì)測量吸光度來評估細(xì)胞的生長狀況。它的優(yōu)點(diǎn)在于靈敏度高、操作簡便、無毒且無需有機(jī)溶劑，是現(xiàn)代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中不可缺的工具。
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