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ELISAS實(shí)驗(yàn)抗原的攝取
更新時(shí)間:2013-11-28 點(diǎn)擊次數(shù):1746次

ELISAS實(shí)驗(yàn)抗原的攝取

 

1 抗原的攝取  任何血清學(xué)試驗(yàn)都依賴于具有價(jià)、特異性強(qiáng)的抗血清的產(chǎn)生,而抗血清的制備離不開抗原的收集、保存和提取。采回的害蟲饑餓24h后,將等體積的磷酸緩沖液(PBS)滴入備用的害蟲中,研磨后加入過量的PBS(PH=7.4),4℃下攪拌24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,分離上清液。沉渣用上法重復(fù)抽提一次。

 

將兩次所得的上清液混合后,置于4℃下更換多次冷鹽水透析24h48h。透析液用冰凍干燥法或反透析法進(jìn)行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計(jì)測定蛋白質(zhì)含量,得到適當(dāng)濃度的蛋白質(zhì)溶液即位抗原。

 

  抽提過程中應(yīng)注意:①所有的處理都需在低溫(4℃)下進(jìn)行,以防蛋白質(zhì)變性:②若抗原溶液需保存較長的時(shí)間,則需加防腐劑(如NaN3)或在凍干狀態(tài)下保存:③為制備特異性強(qiáng)的抗血清,抗原可用標(biāo)準(zhǔn)的生化技術(shù)進(jìn)行純化:④如一次不能收集足夠的抗原,可將每次的蟲體保存在-20℃或?qū)⒖乖瓋龈芍钡椒e累足夠的量。


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